Pepsin เป็นเอนไซม์ที่สำคัญในระบบย่อยอาหารส่วนใหญ่ผลิตในกระเพาะอาหาร มันมีบทบาทสำคัญในการแบ่งโปรตีนออกเป็นเปปไทด์ขนาดเล็กช่วยอำนวยความสะดวกในการดูดซึมสารอาหารที่จำเป็นของร่างกาย ในฐานะซัพพลายเออร์ Pepsin การทำความเข้าใจวิธีการตรวจจับระดับ pepsin ไม่เพียง แต่เป็นประโยชน์ต่อการควบคุมคุณภาพ แต่ยังให้ข้อมูลที่มีค่าแก่ลูกค้าของเรา ในบล็อกนี้เราจะสำรวจวิธีการต่าง ๆ ในการตรวจจับระดับ pepsin
1. วิธีสเปกโตรโฟโตเมทริก
Spectrophotometry เป็นเทคนิคที่ใช้กันอย่างแพร่หลายในการตรวจจับระดับ pepsin วิธีนี้ขึ้นอยู่กับหลักการที่ว่า pepsin สามารถกระตุ้นการไฮโดรไลซิสของพื้นผิวเฉพาะและการเปลี่ยนแปลงการดูดกลืนแสงของส่วนผสมปฏิกิริยาเมื่อเวลาผ่านไปสามารถวัดได้
หนึ่งในสารตั้งต้นทั่วไปที่ใช้ในการตรวจสเปกโตรโฟโตเมทริกคือฮีโมโกลบิน เมื่อ Pepsin ทำหน้าที่ฮีโมโกลบินมันจะแบ่งโปรตีนออกเป็นชิ้นเล็ก ๆ ปฏิกิริยามักจะดำเนินการที่ค่า pH ที่เป็นกรด (ประมาณ pH 2) ซึ่งเป็นค่า pH ที่ดีที่สุดสำหรับกิจกรรม pepsin หลังจากเวลาตอบสนองที่กำหนดกรดไตรคลอโรอะซิติก (TCA) จะถูกเพิ่มเข้าไปในส่วนผสมของปฏิกิริยาเพื่อตกตะกอนโปรตีนที่ไม่ได้แยกแยะ การดูดกลืนแสงของ supernatant ซึ่งมีเปปไทด์ที่ย่อยแล้วจะถูกวัดที่ความยาวคลื่นเฉพาะ (ปกติคือ 280 นาโนเมตร) การเพิ่มขึ้นของการดูดกลืนแสงเป็นสัดส่วนกับปริมาณของ pepsin ที่มีอยู่ในตัวอย่าง
สารตั้งต้นอื่นที่สามารถใช้งานได้คือเคซีน เช่นเดียวกับการทดสอบฮีโมโกลบิน pepsin ไฮโดรไลซีนเคซีนลงในเปปไทด์ขนาดเล็ก ปฏิกิริยายังดำเนินการที่ค่า pH ที่เป็นกรดและการดูดกลืนแสงของผลิตภัณฑ์ที่ถูกย่อยนั้นถูกวัด วิธีการทางสเปกโตรโฟโตเมทริกนั้นค่อนข้างง่ายเร็วและสามารถให้ผลลัพธ์เชิงปริมาณ อย่างไรก็ตามพวกเขาอาจได้รับผลกระทบจากสิ่งสกปรกในตัวอย่างและการปรากฏตัวของเอนไซม์หรือสารอื่น ๆ ที่สามารถดูดซับที่ความยาวคลื่นเดียวกัน
2. วิธีฟลูออโรเมทริก
วิธีการฟลูออโรเมตริกให้ความไวสูงกว่าเมื่อเทียบกับวิธีสเปกโตรโฟโตเมทริก วิธีการเหล่านี้ขึ้นอยู่กับการใช้พื้นผิวฟลูออเรสเซนต์ที่ถูกแยกออกจาก pepsin ทำให้เกิดการเปลี่ยนแปลงความเข้มของฟลูออเรสเซนต์
ตัวอย่างหนึ่งของสารตั้งต้นฟลูออเรสเซนต์คือ fluorescein isothiocyanate (FITC)-casein ที่มีป้ายกำกับ เมื่อ pepsin hydrolyzes เคซีนที่ติดฉลาก FITC ชิ้นส่วนฟลูออเรสเซนต์จะถูกปล่อยลงสู่สารละลายและความเข้มของการเรืองแสงจะเพิ่มขึ้น ปฏิกิริยาจะถูกตรวจสอบแบบเรียลไทม์โดยใช้ฟลูออโรมิเตอร์และอัตราการเพิ่มขึ้นของการเรืองแสงเป็นสัดส่วนกับกิจกรรมของ pepsin
วิธีการฟลูออโรเมทริกมีความไวสูงและสามารถตรวจจับ pepsin ในระดับต่ำ พวกเขายังได้รับผลกระทบน้อยกว่าจากการดูดซับพื้นหลังเมื่อเทียบกับวิธีสเปกโตรโฟโตเมทริก อย่างไรก็ตามพวกเขาต้องการอุปกรณ์พิเศษ (ฟลูออโรเมตร) และสารตั้งต้นฟลูออเรสเซนต์ซึ่งอาจมีราคาแพงกว่า
3. วิธีการทางภูมิคุ้มกัน
วิธีการทางภูมิคุ้มกันเช่นการทดสอบอิมมูโนซอร์เบนท์ที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์ (ELISA) นั้นขึ้นอยู่กับการจับตัวของแอนติบอดีกับ Pepsin ELISA สามารถใช้ในการตรวจจับทั้งความเข้มข้นและกิจกรรมของ Pepsin
ในแซนวิช ELISA แอนติบอดีที่จับได้เฉพาะกับ pepsin จะถูกตรึงบนพื้นผิวที่เป็นของแข็ง (เช่นไมโครเพลทที่ดี) ตัวอย่างที่มี pepsin จะถูกเพิ่มเข้าไปในบ่อน้ำและ pepsin ผูกกับแอนติบอดีที่จับได้ หลังจากล้างเพื่อกำจัดสารที่ไม่ได้ผูกไว้จะมีการตรวจจับแอนติบอดีด้วยเอนไซม์ (เช่น Horseradish peroxidase) แอนติบอดีตรวจจับผูกกับ epitope ที่แตกต่างกันในโมเลกุล pepsin จากนั้นมีการเพิ่มสารตั้งต้นและเอนไซม์เร่งปฏิกิริยาที่สร้างการเปลี่ยนสี ความเข้มของสีเป็นสัดส่วนกับปริมาณของ pepsin ในตัวอย่าง
วิธีการทางภูมิคุ้มกันนั้นมีความเฉพาะเจาะจงสูงและสามารถแยกแยะ pepsin ออกจากโปรตีนอื่น ๆ พวกเขายังสามารถใช้ในการวัดระดับ pepsin ในตัวอย่างทางชีวภาพที่ซับซ้อนเช่นเลือดหรือน้ำลาย อย่างไรก็ตามพวกเขาต้องการการพัฒนาแอนติบอดีที่เฉพาะเจาะจงและอาจใช้เวลานานและมีราคาแพง
4. Zymography
Zymography เป็นเทคนิคที่ช่วยให้การสร้างภาพของกิจกรรม Pepsin ในเมทริกซ์เจล ในวิธีนี้ตัวอย่างที่มี pepsin จะถูกโหลดลงบนเจล polyacrylamide ที่มีสารตั้งต้นเช่นเจลาตินหรือเคซีน หลังจากอิเล็กโตรโฟรีซิสเจลจะถูกบ่มในบัฟเฟอร์ที่เหมาะสมที่ค่า pH ที่เป็นกรดเพื่อให้ pepsin ไฮโดรไลซ์สารตั้งต้น เจลจะถูกย้อมด้วยคราบโปรตีนเช่น Coomassie Blue พื้นที่ที่ Pepsin ได้ไฮโดรไลซ์สารตั้งต้นจะปรากฏเป็นแถบที่ชัดเจนกับพื้นหลังสีน้ำเงิน
Zymography ให้ข้อมูลเกี่ยวกับน้ำหนักโมเลกุลของ Pepsin และไอโซฟอร์ม นอกจากนี้ยังสามารถใช้เพื่อเปรียบเทียบกิจกรรมของ Pepsin ในตัวอย่างที่แตกต่างกัน อย่างไรก็ตามมันเป็นวิธีการเชิงคุณภาพหรือกึ่งเชิงปริมาณและไม่ได้ให้ข้อมูลเชิงปริมาณที่ถูกต้องเกี่ยวกับระดับ pepsin
5. วิธีการโครมาโตกราฟี
วิธีการโครมาโตกราฟีเช่นโครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง (HPLC) สามารถใช้ในการแยกและหาปริมาณ pepsin HPLC สามารถแยก pepsin ออกจากโปรตีนและสารอื่น ๆ ในตัวอย่างตามคุณสมบัติทางกายภาพและทางเคมีเช่นขนาดประจุและความไม่ชอบน้ำ
ในการวิเคราะห์ HPLC ทั่วไปตัวอย่างจะถูกฉีดเข้าไปในคอลัมน์ที่เต็มไปด้วยเฟสคงที่ เฟสมือถือจะถูกส่งผ่านคอลัมน์และส่วนประกอบที่แตกต่างกันในตัวอย่างจะถูกชะออกในเวลาที่ต่างกันตามการโต้ตอบกับเฟสคงที่ สามารถตรวจพบ pepsin eluted โดยใช้เครื่องตรวจจับเช่นเครื่องตรวจจับ UV หรือเครื่องสเปกโตรมิเตอร์มวล
วิธีการโครมาโตกราฟีสามารถให้ผลลัพธ์เชิงปริมาณที่แม่นยำและยังสามารถใช้ในการวิเคราะห์ความบริสุทธิ์ของตัวอย่าง pepsin อย่างไรก็ตามพวกเขาต้องการอุปกรณ์พิเศษและบุคลากรที่ผ่านการฝึกอบรมและการวิเคราะห์อาจเป็นเวลา - การบริโภค
ในฐานะซัพพลายเออร์ Pepsin เรามั่นใจได้ถึงคุณภาพของผลิตภัณฑ์ Pepsin ของเราผ่านการทดสอบอย่างเข้มงวดโดยใช้วิธีการตรวจจับเหล่านี้ Pepsin ของเรามีความบริสุทธิ์และกิจกรรมสูงตอบสนองความต้องการที่หลากหลายของลูกค้าของเราในอุตสาหกรรมต่าง ๆ เช่นอาหารเวชภัณฑ์และเทคโนโลยีชีวภาพ
หากคุณมีความสนใจในผลิตภัณฑ์ Pepsin ของเราหรือหากคุณมีคำถามใด ๆ เกี่ยวกับการตรวจจับ Pepsin หรือแอปพลิเคชันโปรดติดต่อเราเพื่อรับการจัดซื้อและการอภิปรายเพิ่มเติม นอกจากนี้เรายังเสนอผลิตภัณฑ์ที่เกี่ยวข้องเช่นโปรตีนข้าวอินทรีย์-โรงงาน GMP จัดหาไบโอตินธรรมชาติ, และl Glutamine Powder Supplement Supplier- เราหวังว่าจะได้สร้างความร่วมมือระยะยาวและเป็นประโยชน์ร่วมกันกับคุณ
การอ้างอิง
- Barrett, AJ, & McDonald, JK (1980) วิธีการในเอนไซม์: เอนไซม์โปรตีโอไลติก: แอสปาร์ตและเมทัลโลเปปไทเดส สื่อวิชาการ
- Wilson, K. , & Walker, J. (2005) หลักการและเทคนิคของชีวเคมีเชิงปฏิบัติ สำนักพิมพ์มหาวิทยาลัยเคมบริดจ์
- Lottspich, F. , & Zorbas, H. (1998) Bioanalytics Spectrum Akademischer Verlag
